ddPCR定量低丰度芽孢绝对计数

信息概要

ddPCR定量低丰度芽孢绝对计数是一种高灵敏度、高特异性的分子检测技术，适用于环境、食品、医疗等领域中低浓度芽孢的精准定量。该技术通过微滴化分割样本，结合荧光信号分析，可实现单拷贝级别的绝对定量，克服传统PCR技术的局限性。检测低丰度芽孢对食品安全控制、环境微生物监测、临床病原体诊断等具有重要意义，尤其适用于痕量污染溯源和生物安全风险评估。

检测项目

芽孢总数绝对定量, 蜡样芽孢杆菌, 炭疽芽孢杆菌, 枯草芽孢杆菌, 苏云金芽孢杆菌, 产气荚膜梭菌, 艰难梭菌, 嗜热脂肪芽孢杆菌, 地衣芽孢杆菌, 凝结芽孢杆菌, 短小芽孢杆菌, 环状芽孢杆菌, 巨大芽孢杆菌, 肺炎克雷伯菌, 肉毒梭菌, 破伤风梭菌, 产孢梭菌, 芽孢形成率, 芽孢存活率, 芽孢灭活效率

检测范围

食品加工环境样本, 饮用水, 乳制品, 肉制品, 罐头食品, 发酵制品, 药品生产环境, 医疗器材, 临床标本, 土壤样本, 空气样本, 废水样本, 化妆品, 动物饲料, 植物提取物, 工业原料, 实验室污染监测, 生物制剂, 航天器洁净度检测, 文物保护环境

检测方法

微滴式数字PCR(ddPCR)：通过油包水微滴分割样本，实现单分子扩增和绝对定量

荧光探针法：采用TaqMan探针特异性识别目标芽孢基因序列

多重PCR检测：同步检测多种芽孢的特异性标记基因

热激活预处理：选择性激活芽孢增强检测信号

膜过滤富集法：通过滤膜浓缩低浓度样本中的芽孢

免疫磁珠分离：利用抗体偶联磁珠特异性捕获目标芽孢

梯度离心纯化：根据密度差异分离芽孢与杂质

SYBR Green实时检测：通过双链DNA结合荧光信号定量

巢式PCR扩增：两轮扩增提高低丰度样本检出率

竞争性内标法：加入已知浓度内标校正检测效率

微流控芯片技术：集成样本处理和检测于微型化平台

数字微滴成像分析：高通量采集微滴荧光信号

熔解曲线分析：验证扩增产物的特异性

基因组DNA提取优化：针对芽孢厚壁结构的特殊裂解方案

自动化液体处理：减少人为操作误差提高重现性

检测仪器

QX200微滴式数字PCR系统, Bio-Rad QXONE, QuantStudio 3D数字PCR系统, 7500 Fast实时荧光定量PCR仪, StepOnePlus实时PCR系统, Applied Biosystems 7500, LightCycler 480 II, CFX96 Touch实时PCR检测系统, QIAcuity数字PCR系统, Nanodrop分光光度计, Qubit荧光定量仪, Covaris破碎仪, KingFisher磁珠纯化系统, Biomek液体处理工作站, Agilent 2100生物分析仪

北检院部分仪器展示