过敏原蛋白Western Blot检测是一种高特异性、高灵敏度的免疫检测技术,广泛应用于食品、药品、化妆品等产品中过敏原蛋白的定性或半定量分析。该检测通过抗原-抗体特异性结合的原理,能够准确识别样品中的目标过敏原蛋白,为产品质量控制、安全性评估及法规合规性提供科学依据。过敏原检测对于过敏人群的健康保护至关重要,可有效避免因接触过敏原引发的过敏反应,同时帮助企业满足国内外相关法规要求,提升产品市场竞争力。
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SDS-PAGE电泳:通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。
蛋白转印:将分离的蛋白质从凝胶转移到固相载体如硝酸纤维素膜上。
封闭:使用脱脂奶粉或BSA封闭膜上的非特异性结合位点。
一抗孵育:加入特异性一抗与目标蛋白结合。
二抗孵育:加入酶标记的二抗与一抗结合。
化学发光检测:通过酶促反应产生化学发光信号检测目标蛋白。
显色检测:使用底物产生可见颜色反应检测目标蛋白。
图像分析:使用成像系统捕获并分析信号强度。
定量分析:通过标准曲线对目标蛋白进行半定量分析。
质控验证:使用阳性对照和阴性对照验证检测结果可靠性。
方法验证:通过特异性、灵敏度、重复性等参数验证方法性能。
样品前处理:采用适当的提取缓冲液提取样品中的蛋白质。
蛋白浓度测定:使用BCA或Bradford法测定样品蛋白浓度。
免疫印迹优化:调整抗体浓度、孵育时间等参数优化检测条件。
数据分析报告:生成包含检测结果和分析结论的详细报告。
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