四甲基联苯胺(标准参考

检测范围

四甲基联苯胺（3,3&39;,5,5&39;-Tetramethylbenzidine，TMB）的检测主要应用于以下领域：

1. 生物医学检测：如酶联免疫吸附试验（ELISA）中作为过氧化物酶的显色底物。
2. 环境监测：检测水体或土壤中的氧化性污染物（如过氧化氢、臭氧）。
3. 食品安全：分析食品中残留的过氧化物酶活性或氧化剂含量。
4. 工业质量控制：用于化学合成过程中TMB纯度及反应产物的监控。

检测项目

1. TMB纯度分析：检测样品中四甲基联苯胺的含量及杂质比例。
2. 显色反应效率：评估TMB在过氧化物酶催化下的显色强度及稳定性。
3. 氧化产物检测：监测TMB被氧化生成的蓝色或黄色产物的浓度。
4. 残留溶剂及杂质：检测合成或储存过程中可能引入的有机溶剂残留（如甲醇、乙酸乙酯）。
5. 稳定性测试：评估TMB在不同温度、pH条件下的降解特性。

检测仪器

1. 紫外-可见分光光度计：用于测定TMB显色反应的吸光度（通常检测波长为370 nm或652 nm）。
2. 高效液相色谱仪（HPLC）：配备C18色谱柱及紫外检测器，用于纯度分析和杂质定量。
3. 气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）：检测有机溶剂残留及挥发性杂质。
4. 酶标仪：用于ELISA实验中TMB显色反应的动力学分析。
5. pH计与恒温箱：用于稳定性测试中的环境条件控制。

检测方法

1. 分光光度法

   • 显色反应检测：将TMB与过氧化物酶（如辣根过氧化物酶）及过氧化氢混合，在25°C下反应10分钟，测定652 nm处的吸光度，计算显色效率。
   • 氧化产物定量：通过标准曲线法，基于370 nm吸光度变化确定氧化产物（二亚胺）的浓度。

2. HPLC法

   • 色谱条件：流动相为甲醇-水（70:30，v/v），流速1.0 mL/min，检测波长280 nm。
   • 纯度分析：通过面积归一化法计算TMB主峰面积占比，杂质峰需与对照品比对确认。

3. GC-MS法

   • 溶剂残留检测：样品经顶空进样，采用DB-5毛细管柱，程序升温（50°C至250°C），质谱选择离子模式（SIM）定量。

4. 稳定性测试

   • 加速实验：将TMB溶液置于40°C、相对湿度75%条件下储存30天，定期取样检测纯度及显色性能变化。

5. 酶标仪动力学分析

   • ELISA应用：在96孔板中加入TMB底物，启动反应后每隔30秒测定450 nm吸光度，绘制反应动力学曲线。

北检院部分仪器展示